近日,我组紫外激光解离-质谱系统在蛋白质组学中的应用取得新进展,研究结果发表于Analytica Chimica Acta。
由于目前仍没有商品化的193-nm UVPD质谱,在该工作中,我们对Orbitrap Fusion Lumos Tribrid高分辨质谱进行了改装,实现了193 nm激光的引入和外触发控制,搭建了193-nm UVPD-高分辨率质谱平台。我们系统研究了组合使用HCD和UVPD碎裂模式以及VAILase和胰蛋白酶酶解策略对复杂蛋白质酶解肽段样品的分析能力,实现了蛋白质序列鉴定覆盖率和可靠性的同时显著提升。
Fig 1. Proteomic analysis workflow combing trypsin and VAILase digestion with HCD and 193-nm UVPD fragmentation.
193 nm紫外激光解离(193-nm UVPD)在肽段分析中可以产生a、b、c、x、y、z系列特征碎片离子,显著提高了胰蛋白酶和VAILase酶解肽段的可靠性,平均XCorr值提高10%。
Fig 2. The MS/MS spectra of trypsin-digested peptides (a) MASASGAMAK (1+), (b) NQGGYGGSSSSSSYGSGR (2+), and VAILase-digested peptides (c) FDLGGGTFDV (1+), and (d) FHSFGGGTGSGFTSLL (2+) by utilizing HCD (left) and UVPD (right) fragmentation modes, respectively.
我组已拥有成熟的可进行肽段193-nm UVPD分析的质谱平台,而在肽段水平上进行的高能UVPD也可以为整体蛋白质的研究提供基础,另外我组基于其他波长的UVPD的蛋白质组学分析也正在持续推进。